隨著當(dāng)今化學(xué)家不斷為新型藥物和生物制藥產(chǎn)品開發(fā)出新的分析方法，選擇重現(xiàn)性優(yōu)良的HPLC色譜柱變得至關(guān)重要。選用的色譜柱應(yīng)能在新型藥品的整個生命周期內(nèi)得到一致的色譜結(jié)果。Symmetry、SymmetryShield™和Symmetry300™色譜柱優(yōu)異的重現(xiàn)性是沃特世在HPLC色譜柱領(lǐng)域不斷改進(jìn)，精益求精的成果。
每根Symmetry色譜柱都附帶一份COA報告(Certificate of Analysis)和一份性能測試色譜圖。COA報告為Symmetry色譜柱中所用的填料批次所特有，包括凝膠批號、未鍵合顆粒和鍵合
填料分析結(jié)果，以及色譜結(jié)果和檢測條件。性能測試色譜圖則會提供每根色譜柱的以下信息：凝膠批號、色譜柱序列號、USP理論塔板數(shù)、USP拖尾因子、容量因子以及色譜條件。
這些數(shù)據(jù)應(yīng)妥善保存，以備將來參考。
a. 色譜柱安裝
注：下述步驟中給出的流速適用于典型的4.6 mm內(nèi)徑色譜柱。可根據(jù)所安裝Symmetry色譜柱的柱內(nèi)徑、柱長、粒徑和柱壓相應(yīng)地提高或降低流速。色譜柱內(nèi)徑和/或柱長改變時，請參閱“放大/縮小等度分離方法"部分計(jì)算流速。有關(guān)HPLC連接的詳細(xì)信息，請參閱“將色譜柱連接到HPLC"部分。
1. 灌注泵系統(tǒng)，排出含緩沖液的流動相，然后將色譜柱的入口端連接至進(jìn)樣器出口。
2. 用100%有機(jī)流動相（甲醇或乙腈）沖洗色譜柱，泵流速設(shè)置為0.1 mL/min，并在5 min內(nèi)增加至1 mL/min。
3. 當(dāng)流動相可從色譜柱出口自由流出時，停止液流并將色譜柱出口連接至檢測器。這樣可以防止空氣進(jìn)入檢測系統(tǒng)，使系統(tǒng)更快達(dá)到基線平衡。
4. 按照步驟2所述逐漸增加流速。
5. 一旦柱壓和基線達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，即可繼續(xù)進(jìn)行下一部分操作。
b. 色譜柱平衡
Symmetry色譜柱出廠時用100%乙腈保存。在更換為其他流動相體系之前，務(wù)必確保流動相的兼容性。請用至少10倍柱體積的流動相平衡色譜柱（請參閱表1中的空色譜柱體積）。為避免流動相緩沖液在色譜柱或系統(tǒng)中發(fā)生沉淀，請使用5倍柱體積的水/有機(jī)溶劑混合物沖洗色譜柱，其中有機(jī)溶劑比例應(yīng)與所需緩沖流動相中的有機(jī)溶劑比例相同或更低。（例如，使用60%甲醇水溶液沖洗色譜柱和HPLC系統(tǒng)，然后再引入60%甲醇/40%緩沖液組成的流動相）。
注：如果流動相中含有低濃度添加劑（例如離子對試劑），那么完成平衡可能需要100-200倍柱體積的流動相。此外，當(dāng)流動相中含有甲酸鹽時（如甲酸銨、甲酸等），初始柱平衡時間也可能較長。
c. 初始柱效測定
1. 使用色譜柱之前，需要先進(jìn)行一次柱效測試。沃特世建議您在收到色譜柱后使用合適的溶質(zhì)混合物（例如“性能測試色譜圖"中給出的溶質(zhì)混合物）對色譜柱進(jìn)行測試。
2. 測定理論塔板數(shù)(N)，并定期對比該數(shù)值。
3. 按預(yù)定的時間間隔進(jìn)行重復(fù)測試，跟蹤色譜柱性能隨時間的變化情況。采用兩套不同的HPLC系統(tǒng)進(jìn)行測試時，所得柱效結(jié)果可能會有微小差異，這可能是由于連接質(zhì)量、運(yùn)行環(huán)
境、系統(tǒng)電子設(shè)備、試劑質(zhì)量、色譜柱條件和操作員技術(shù)等因素所致。
