常規反相分析色譜柱進行實際樣品分析的推薦步驟

更新時間:2025-01-14      點擊次數:813

常規反相分析色譜柱進行實際樣品分析的推薦步驟:

1. 確保流動相潔凈,每隔24-48小時就應新配水相流動相,并同時更換或仔細清洗流動相溶劑瓶,以避免流動相長菌。確保實驗室純水系統工作正常。

2. 確保樣品不含顆粒型雜質。如樣品過臟,或有微粒存在,需要考慮適合的樣品制備方法。在使用樣品過濾器時,確保濾膜為0.22 μm,且與樣品溶劑完全兼容(不發生溶解)。也可考慮使用高速離心法去除顆粒性雜質,例如8000 rpm轉速以上離心20分鐘后,移取樣品上清液進樣。

3. 確保樣品溶液與流動相條件兼容,進樣后不會發生沉淀、或溶劑不互溶情況。通常使用流動相或比流動相洗脫強度弱的溶液(即有機溶劑比例較低)溶解或稀釋樣品,這樣可以獲得更好的峰形和檢測靈敏度。

4. 如系統在線混合生成流動相,預先檢查流動相各組分的兼容性。例如,當磷酸鹽緩沖液與高濃度乙腈(例如?70%)混用時,可能發生鹽析出。

5. 了解色譜柱的操作使用限度。如果所使用的流動相條件、柱溫、以及樣品溶液條件,不利于色譜柱壽命時,請使用保護柱以延長柱壽命。

6. 在使用流動相進行柱平衡之前,如果流動相中含有可能析出的緩沖鹽,先使用5倍柱體積的有機溶劑-水溶液進行過渡。例如,在使用40/60甲醇/磷酸鹽緩沖液流動相之前,先使用5倍柱體積的40/60甲醇/純水溶液沖洗色譜柱。

7. 在常規分析過程中,每針或間隔若干針清洗柱內可能積累的污染物。完成分析后,徹底清洗色譜柱,除去柱內緩沖鹽和污染物。

8. 在色譜柱使用過程中,定期進行柱效測試,記錄塔板數與壓力,從而追蹤監控色譜柱的性能變化。柱效測試方法應固定。

9. 反相色譜柱應保存于100%乙腈中。如色譜柱使用于高溫或極端PH條件,或停用色譜柱超過72小時,用100%乙腈保存色譜柱。

10. 使用原配的柱堵頭,確保堵頭擰緊以避免柱內溶劑揮發。取放色譜柱時避免磕碰掉落。

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