常規反相分析色譜柱新色譜柱開啟和安裝的推薦步驟

更新時間:2025-01-13      點擊次數:1328

何謂常規反相色譜柱?

  那些在硅膠或雜化基質顆粒上鍵合了如C18C8C4或苯基等鍵合相的色譜填料所裝填的色譜柱,按反相色譜條件進行操作和分離。C18是反相液相色譜柱中使用較為廣泛的一款色譜柱,使用維護參考如下。

常規反相分析色譜柱新色譜柱開啟和安裝的推薦步驟:

1. 使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統,確保系統干凈,不含任何緩沖鹽和污染物。

2. 取用色譜柱時避免磕碰掉落。

3. 將色譜柱入口端連接到系統上,柱出口端先不要連接,色譜柱身上有箭頭標明正確流向。

4. 0.1 mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱,然后在2分鐘內將流速升至0.5 mL/min

5. 當溶劑均勻的從柱出口端流出,停流速,將色譜柱出口端接到系統檢測器上(這樣可以避免氣泡進入檢測系統,并且可快速達到基線平衡)

6. 重啟流速,按照步驟4的方法逐漸提高流速,至常規分析時所使用的流速。

7. 參考柱效測試報告中的方法,使用該流動相條件平衡色譜柱,通常需要使用5-10倍柱體積的流動相,直至壓力與基線穩定。

8. 測試柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物,請聯系沃特世化學消耗品部門尋求支持,使用合適的濃度與進樣量。柱效結果略低于

柱效測試報告屬正常情況。如結果明顯偏低、峰形拖尾,提示色譜柱和/或所使用的液相系統處于非理想狀態,需要進行故障排查。

 

  當使用2.1 mm內徑色譜柱時,建議優化系統以減少譜帶展寬,包括:使用檢測器微量流通池,減少進樣器loop環體積,使用較小內徑(0.005’’0.12 mm)的系統管路。并確保管路與色譜柱連接恰當、無死體積。

 

  當使用小顆粒填料(2.5 μm)短柱進行高效快速分離時,需要考慮以下因素:

確保管路與色譜柱連接恰當、無死體積,盡量優化系統減少譜帶展寬;

●提高采樣頻率至10/秒以上;

●較小粒徑的色譜柱產生的柱壓較高,而較小粒徑要達到理想的色譜效率所需的線速度較高,請根據所用LC系統的實際情況調節流速;

●可使用較高的柱溫來補償小顆粒造成的壓力升高,例如40℃。使用雜化顆粒反相色譜柱時,可使用45℃或更高。


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